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elisa實驗加樣步驟為什么要避免氣泡產生
1.通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍,導致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內反應不均一。
3.包被時有氣泡的話,將導致包被不*實際包被量下降--弱陽性甚至假陰性。
4.封閉時有氣泡的話,將導致大量未結合位點的存在,引起非特異性結合--本底增高,假陽性。
5.加樣時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性。
6.加二抗時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性(競爭法相反----假陽性)。
7.加顯色液時有氣泡的話---顯色不*。
8.加終止液時有氣泡的話(1、不能*終止反應 2、影響酶標儀比色,OD值增高)
9.洗滌時有氣泡的話,非特異性結合物不能*洗去,做無用功。
避免方法:
1、加樣時盡量靠近孔底(不要接觸孔底),用力均勻,不要過快過猛。
2、封閉時一定要加滿孔,
3、洗滌時一定要加滿孔(重要),氣泡會浮上來zui終驅除。手工洗板時一定要吸干水分并用力拍干。
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