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產(chǎn)品分類 / PRODUCT
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中文名稱:*脫羧酶自身抗體檢測(cè)試劑盒
英文名稱:GADELISA KIT
規(guī)格:96T/48T
保存條件:2-8℃
*脫羧酶自身抗體檢測(cè)試劑盒用 途:用于定量檢測(cè)血清、血漿及相關(guān)液體樣本中*脫羧酶自身抗體 的含量。
間接ELISA方法用以檢測(cè)血清中抗體,包被抗原為自己原核表達(dá)純化蛋白,已通過(guò)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)檢驗(yàn)(純化抗原與陽(yáng)性血清有沉淀線,而陰性血清無(wú))。用該抗原做方陣試驗(yàn),抗原梯度為0.3,0.6,0.9,1.2,1.5,1.8,2.1微克,血清分別稀釋1:5,1:10,1:50,1:100,1:200,1:300。步驟如下:
① 取空白酶標(biāo)板,于每孔中加入純化蛋白溶液100μL ,于振蕩器上震蕩混勻,用封口膜封蓋酶標(biāo)板,室溫包被一夜。
② 取下封口膜,棄去酶標(biāo)板內(nèi)溶液,用洗劑液(1×PBST)洗劑酶標(biāo)板5次,zui后一次吸干。每孔加入1%BSA封閉液100μL, 37℃封閉1h。
③取下封口膜,棄去酶標(biāo)板內(nèi)溶液,用洗劑液(1×PBST)洗劑酶標(biāo)板5次,zui后一次吸干。每孔加入一抗血清100μL,37℃封閉1h。
④取下封口膜,棄去酶標(biāo)板內(nèi)溶液,用洗劑液(1×PBST)洗劑酶標(biāo)板5次,zui后一次吸干。每孔加入酶標(biāo)二抗兔抗羊IgG-HRP 100μL,37℃封閉1h。
⑤取下封口膜,棄去酶標(biāo)板內(nèi)溶液,用洗劑液(1×PBST)洗劑酶標(biāo)板5次,zui后一次吸干。每孔加底物A 50μL和底物B 50μL,震蕩混勻,室溫顯色10~15min。
⑥每孔加入終止液50μL,立刻在酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)下讀取OD值。線性范圍的影響有兩個(gè)因素:1、本身抗體的親和力,親和力越高靈敏度越高,高點(diǎn)與低點(diǎn)比值也就越高,若標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率接近于1,抗體親和力還是可以的。比值沒(méi)有相關(guān)規(guī)定說(shuō)一定要高于64。
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