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中文名稱:I型原膠原N端前肽檢測試劑盒
英文名稱:PINPELISA KIT
規(guī)格:96T/48T
保存條件:2-8℃
I型原膠原N端前肽檢測試劑盒用 途:用于定量檢測血清、血漿及相關(guān)液體樣本中I型原膠原N端前肽 的含量。
I型原膠原N端前肽檢測試劑盒間接ELISA方法用以檢測血清中抗體,包被抗原為自己原核表達純化蛋白,已通過瓊脂擴散試驗檢驗(純化抗原與陽性血清有沉淀線,而陰性血清無)。用該抗原做方陣試驗,抗原梯度為0.3,0.6,0.9,1.2,1.5,1.8,2.1微克,血清分別稀釋1:5,1:10,1:50,1:100,1:200,1:300。步驟如下:
① 取空白酶標板,于每孔中加入純化蛋白溶液100μL ,于振蕩器上震蕩混勻,用封口膜封蓋酶標板,室溫包被一夜。
② 取下封口膜,棄去酶標板內(nèi)溶液,用洗劑液(1×PBST)洗劑酶標板5次,zui后一次吸干。每孔加入1%BSA封閉液100μL, 37℃封閉1h。
③I型原膠原N端前肽檢測試劑盒取下封口膜,棄去酶標板內(nèi)溶液,用洗劑液(1×PBST)洗劑酶標板5次,zui后一次吸干。每孔加入一抗血清100μL,37℃封閉1h。
④取下封口膜,棄去酶標板內(nèi)溶液,用洗劑液(1×PBST)洗劑酶標板5次,zui后一次吸干。每孔加入酶標二抗兔抗羊IgG-HRP 100μL,37℃封閉1h。
⑤取下封口膜,棄去酶標板內(nèi)溶液,用洗劑液(1×PBST)洗劑酶標板5次,zui后一次吸干。每孔加底物A 50μL和底物B 50μL,震蕩混勻,室溫顯色10~15min。
⑥每孔加入終止液50μL,立刻在酶標儀450nm波長下讀取OD值。線性范圍的影響有兩個因素:1、本身抗體的親和力,親和力越高靈敏度越高,高點與低點比值也就越高,若標準曲線的斜率接近于1,抗體親和力還是可以的。比值沒有相關(guān)規(guī)定說一定要高于64。
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